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🔬 PCR과 RT-PCR이란?**PCR (Polymerase Chain Reaction)**과 **RT-PCR (Reverse Transcription PCR)**은 현대 생명과학 실험에서 가장 기본이자 핵심이 되는 분자생물학 기술입니다. 감염 질환 진단, 유전자 클로닝, 유전체 연구까지—이 기술 없이 실험을 진행하는 건 상상할 수 없습니다.PCR은 DNA의 특정 구간을 수백만 배로 증폭시켜 분석과 조작을 가능하게 해줍니다. 반면 RT-PCR은 RNA로부터 cDNA를 합성한 후 이를 PCR로 증폭하는 방식으로, RNA 기반 분석에 매우 유용합니다.무엇보다 중요한 건 어떤 DNA polymerase를 선택하느냐입니다. 특히 Taq DNA Polymerase, proofreading 기능, OneTaq, ..

Site-Directed Mutagenesis 완벽 가이드소개Site-directed mutagenesis (SDM)는 DNA 염기서열에 특정한 변이를 도입할 수 있는 강력한 분자생물학 기술입니다. 이 기술은 유전자 기능, 단백질 구조, 효소 활성을 연구하는 데 매우 유용합니다. Site-Directed Mutagenesis란?사이트 지향 돌연변이는 DNA의 특정 염기를 의도적으로 바꾸어 단백질 서열에 변화를 주는 기술입니다. 무작위 돌연변이 유도법과는 달리, 정확하고 반복 가능한 결과를 얻을 수 있습니다.활용 분야단백질 공학: 안정성, 활성, 기질 특이성을 향상시키는 변이 도입기능 유전체학: 특정 돌연변이를 통해 유전자 기능 분석질병 모델링: 유전질환 관련 변이를 실험적으로 재현신약 개발: 단백질-약물..

Q5 Site-Directed MutagenesisSite-Directed Mutagenesis(SDM)는 플라스미드 DNA에 특정 변이를 도입할 수 있는 분자생물학의 핵심 기술입니다. 유전자 기능 연구, 단백질 구조 분석, 코돈 최적화 등에 활용되며, 정밀한 유전자 변형을 가능하게 합니다.Site-Directed Mutagenesis란?SDM은 플라스미드 내에서 뉴클레오티드의 삽입, 삭제 또는 치환을 가능하게 합니다. 주요 응용 분야:유전자 발현 연구단백질 구조/기능 분석번역 후 변형 연구전사 인자 결합 부위 조절제한 효소 인식 부위 생성/제거코돈 최적화Q5 Site-Directed Mutagenesis 키트(NEB #E0552)는 강력한 고정밀 PCR 기반 워크플로우로 이 과정을 쉽게 만들 수 있습니..

클로닝 워크플로우에서 라이게이션 반응을 위한 벡터와 인서트의 최적량클로닝은 분자생물학의 기본 기술이며, 라이게이션 반응을 올바르게 설정하는 것이 성공의 핵심입니다. 연구자들이 가장 자주 묻는 질문 중 하나는:"라이게이션 반응에 얼마나 많은 벡터와 인서트를 사용해야 하나요?"이에 대한 답은 DNA 단편의 크기, 벡터 대 인서트 비율, 라이게이션 효율 등 여러 요소에 따라 달라집니다. 이 가이드에서는 표준 권장사항을 자세히 설명하고 클로닝 워크플로우를 최적화하기 위한 단계별 접근법을 제공합니다.라이게이션 반응에서 질량보다 몰 비율이 중요한 이유라이게이션을 설정할 때, 많은 초보자들이 DNA의 질량(ng)에만 집중하고 분자 수(fmoles/pmoles)를 고려하지 않는 실수를 합니다. 왜 이것이 문제인지 설명..

Q5 DNAP의 60~80°C에서의 High Fedelity DNA 증폭 메커니즘HiFi PCR에서 Q5 HiFi DNA 중합효소는 독보적인 성능을 자랑합니다. 그 비결은 바로 교정활동(proofreading), 특히 3'→5' 엑소뉴클레아제 기능에 있습니다. 일반적인 Taq 중합효소와 달리, Q5는 단순히 DNA를 합성할 뿐만 아니라 실시간으로 오류를 검수하고 수정합니다.그렇다면 이 메커니즘은 실제로 어떻게 작동할까요? 그리고 온도는 왜 이렇게 중요한 요소일까요? 자세히 알아보겠습니다.Q5의 이중 기능: 중합효소 vs 엑소뉴클레아제 활성중합효소 활성: 75°C에서 최적, 저온에서는 약화Q5는 75°C에서 가장 효율적으로 뉴클레오타이드를 DNA 사슬에 결합시킵니다. 그러나 온도를 60°C로 낮추면 중합효..

Guidelines for Primer Design and Tm Range Acceptable with the Luna qPCR Products 왜 프라이머 디자인이 qPCR 실험의 성패를 좌우할까? qPCR (quantitative PCR) 실험에서 프라이머 디자인(primer design)은 결과의 정확도와 효율성을 결정하는 가장 중요한 요소 중 하나입니다. 특히 Luna qPCR 제품을 사용할 때는 최적의 조건을 맞추기 위해 프라이머의 Tm (melting temperature)와 amplicon 길이를 신중하게 설계해야 합니다. 이 글에서는 Luna qPCR을 사용할 때 권장하는 프라이머 디자인 가이드라인, 최적 Tm 범위, cDNA synthesis 및 multiplex qPCR..

E. coli 플라스미드 DNA 메틸화 상태 검출 방법이론E. coli에서 플라스미드를 클로닝했는데 Restriction enzyme이 이상하게 작동하지 않았던 경험이 있나요? 보이지 않는 원인은 바로 DNA 메틸화—특히 Dam과 Dcm 메틸화효소에 의한 변형입니다. 이 효소들은 DNA에 메틸기를 추가해 일부 제한효소는 차단하지만 다른 효소들은 정상적으로 작동하게 합니다.그렇다면 메틸화 상태를 확인하려면 어떻게 해야 할까요? 이 가이드에서는 다음 내용을 다룹니다:실험실 검증된 3가지 방법으로 Dam/Dcm 메틸화 확인하기dam-dcm- 형질전환 세포 사용 시기진단 도구로 활용하는 메틸화 의존적 절단 (DpnI 처리 같은)실패한 효소 처리 문제 해결법메틸화 검사가 중요한 이유대부분의 실험실 E. coli ..

키트 없이 홈브루 골든 게이트 클로닝: BsaI-HFv2, Esp3I, BsmBI-v2 효소 비율 최적화골든 게이트 어셈블리는 강력한 분자 클로닝 기술이지만, 상업용 키트는 비쌀 수 있습니다. 상업용 키트 없이도 고효율, 저배경 클로닝을 할 수 있는 방법을 알려드리겠습니다. 이 가이드에서는 BsaI-HFv2, Esp3I, BsmBI-v2 효소와 T4 ligase를 사용한 최적화 방법을 상세히 설명합니다. 골든 게이트 어셈블리에서 효소 비율이 중요한 이유골든 게이트는 BsaI-HFv2 같은 Type IIS 효소가 DNA를 자르고, T4 ligase가 다시 연결하는 과정으로 이루어집니다. 하지만 균형이 맞지 않으면 다음과 같은 문제가 발생합니다:불완전한 절단 (절단되지 않은 백본)높은 클론 backgroun..

23년 7월 최신의 바이오, 제약 소식을 전해드립니다. 제목과 내용을 확인하시고 링크도 걸어두었으니 자세한 내용은 링크를 통해서 확인하시기 바랍니다. 언제든지 새로운 소식을 빨리 듣고 싶으시다면 이메일을 알려주시면 일주일에 한 번 정리해서 드리겠습니다. 콜대원', 개선된 제품으로 어린이 아세트아미노펜 부족 해결 모색 제형 개선: 대원제약이 리콜 문제 해결 및 상분리 방지를 위해 '콜대원 키즈펜'의 특성 변경 승인을 받았다. 시장 영향 및 시기: 식품의약품안전처의 제제 개선 승인을 기다리는 동안 개선된 제품의 재도입으로 어린이용 아세트아미노펜 부족 문제가 해결될 수 있습니다. 대안의 필요성: 리콜 이후 어린이 감기약의 대체재 부족과 공급 제한으로 업계와 소비자의 우려가 제기되고 있어 문제 해결의 중요성이 ..

머크&컴퍼니, ‘키트루다’ 임상시험 결과 발표 머크&컴퍼니사는 자사의 항 프로그램 세포사멸 단백질-1(PD-1) 치료제인 ‘키트루다’의 임상 3상 ‘KEYNOTE-811 시험’ 결과를 공개했습니다. 이번 시험에서는 위암 및 위식도 접합부 선암종 환자들을 대상으로 하였으며, 키트루다와 다른 약물들을 병용한 치료효과가 나타났습니다. HER2 양성 위암 환자들에 무진행 생존기간 개선 효과 확인 머크&컴퍼니사는 HER2 양성 진행성 위암 및 위식도 접합부 선암종 환자들을 대상으로 한 ‘키트루다’ 병용요법의 임상시험 결과를 발표했습니다. 피험자들을 대상으로 한 통계 분석에서 ‘키트루다’와 다른 약물들을 병용한 그룹에서 무진행 생존기간이 유의미하게 개선되었음을 확인할 수 있었습니다. PD-L1 양성 종양에 유익한 ..